Grupo: Leitora de microplacas Categoria: Leitoras de microplacas
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Os sais de tetrazólio, são utilizados em ensaios colorimétricos como o MTT para avaliar a atividade metabólica celular. Células viáveis produzem enzimas que convertem o MTT (brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio) de coloração amarela, para cristais de formazan de coloração roxa. Quanto mais células viáveis presentes em uma amostra, maior a intensidade da coloração. O formazan insolúvel é solubilizado através da adição de um segundo reagente e em seguida, a absorbância das amostras é medida a 590 nm em uma leitora de microplacas para análise da viabilidade ou proliferação celular. Embora fácil de executar, o ensaio de MTT requer a adição de dois reagentes e etapas de incubação, o que pode ser um problema, quando o tempo é limitado ou quando se tem numerosas amostras. Aqui trazemos a comparação entre um ensaio de MTT e um ensaio de citotoxicidade de células colorimétrico (Ambos da ABCAM). Neste último ensaio citado, um único reagente é adicionado às células e depois da incubação, a absorbância é medida em 570 e 675 nm. Ambos os ensaios mencionados podem ser utilizados para medir a proliferação celular (células viáveis) e citotoxicidade. A escolha será baseada principalmente no fluxo de trabalho desejado e tempo necessários.
A tecnologia Alpha usada nos ensaios AlphaScreen® e AlphaLISA® da Revvity é uma tecnologia baseada em esferas que utiliza esferas doadoras e aceptoras que são conjugadas com biomoléculas de interesse. Comumente usada para estudar interações moleculares com algumas vantagens importantes, incluindo miniaturização, alta relação sinal-ruído, formato de ensaio homogêneo e capacidade de multiplexação, tornando esta tecnologia adequada para ensaios de alto rendimento. Quando as biomoléculas interagem, as esferas são aproximadas, permitindo uma transferência de energia para produzir um sinal quimioluminescente que pode ser lido na leitora de microplacas multimodal SpectraMax® i3x e na leitora de microplacas multimodal SpectraMax Paradigm, juntamente com o cartucho de detecção AlphaScreen 384 Std , Cartucho de detecção AlphaScreen 384 HTS ou Cartucho de detecção AlphaScreen 1536 HTS. Todos os cartuchos de detecção AlphaScreen usam um laser de diodo para detecção sensível de ensaios Alpha. Os cartuchos contêm um design otimizado que isola cada poço durante a detecção, reduzindo o crosstalk comumente presente na análise Alpha devido a um tempo de decaimento mais longo. Ao usar o leitor SpectraMax i3x com o software SoftMax Pro, há uma redução de 74 vezes no crosstalk usando a leitura entrelaçada. A leitura entrelaçada funciona lendo cada segundo poço, retornando para ler os que foram ignorados, em vez de ler os poços consecutivamente. Este padrão de leitura melhora a qualidade dos dados, diminuindo a curva dos valores de %CV, especialmente em baixas concentrações.
O sensor PathCheck, é uma nova e revolucionária tecnologia presente nas leitoras de microplacas SpectraMax da Molecular Devices. É utilizado para medir o nível de líquido em cada poço de uma microplaca. O Pathcheck permite a obtenção de valores de absorbância como se estivesse utilizando uma cubeta (com caminho óptico de 1 cm). Desta maneira, detecta erros de pipetagem e faz a correção das diferenças de volume nos poços. O Sensor PathCheck mede o comprimento do caminho óptico utilizando o pico de absorção da água na região espectral do infravermelho próximo (NIR). A altura do pico de absorbância da água é proporcional ao comprimento do caminho óptico através da amostra (que, em um poço da microplaca, é proporcional ao volume da solução). O sensor PathCheck faz medições de absorbância NIR independentes da temperatura e o Software SoftMax Pro realiza os cálculos de correção automaticamente.