Espectrometria de massa proteica intacta de guias de colheita de cultura de células

Publicada em: 28/11/2020

Uma equipe em Massachusetts estabeleceu um método de criação de perfil de distorção na montagem de anticorpos com base na cromatografia líquida de ultra desempenho com exclusão de tamanho desnaturante (UPLC), juntamente com o processo de espectrometria de massa de proteínas intacta. Publicado este mês na revista Analytical Chemistry, os pesquisadores descrevem como esse método será significativo no aprimoramento do método de produção de anticorpos multiespecíficos do tipo IgG usados ​​em inúmeras aplicações terapêuticas e de pesquisa.

O novo método estabelecido pela equipe combinou a cromatografia líquida de ultra desempenho com exclusão de tamanho desnaturante (UPLC) e a espectrometria de massa de proteínas intacta para gerar uma plataforma analítica de alto rendimento para determinar o erro no pareamento de anticorpos, além de impurezas semelhantes aos produtos, como semi-anticorpos.

A equipe demonstrou que o método poderia ser realizado de maneira confiável no fluido de colheita de cultura de células clarificado diretamente, sem necessidade de purificação de proteína A nem de outros métodos de preparação de amostras.

Também foi demonstrado que o método foi bem-sucedido ma geração de dados imparciais sobre a qualidade dos clones, determinando objetivamente o efeito das condições de crescimento.

Além disso, a plataforma mostrou-se um método rápido e econômico de fornecer esses resultados.

Os pesquisadores de Massachusetts examinaram quantidades artísticas de clones que expressavam anticorpos triespecíficos (tsAb) e demonstraram que, embora o desvio de cadeia dependesse principalmente da sequência de anticorpos, eles também descobriram que ela é característica do clone.

Por fim, a equipe foi capaz de mostrar que o tipo e a distribuição de impurezas de espécies mal pareadas e meios anticorpos são influenciados por diferentes condições de crescimento. No entanto, isso pode não afetar a qualidade final do clone.

Fonte: AZO - LIFE SCIENCES